张煜，吴芬芳，张梦，田海山，李校堃
温州医科大学药学院，浙江温州
摘?要
目的：制备、鉴定重组人成纤维细胞生长因子4（rhFGF4）蛋白，观察rhFGF4对高糖损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用及相关分子机制。
方法：构建pET3d-hFGF4重组质粒，利用大肠杆菌表达系统高效表达rhFGF4蛋白。可溶性目的蛋白大多以包涵体的形式表达，制备方法为建立包涵体清洗、变性及肝素柱柱上复性与纯化。采用MTT法检测rhFGF4蛋白促细胞增殖的生物学活性，建立细胞损伤模型并用Westernblot技术检测NF-κB、JNK以及p38蛋白的磷酸化表达。
结果：成功构建重组质粒pET3d-hFGF4。SDS-PAGE电泳及Westernblot鉴定结果表明，rhFGF4蛋白在大肠杆菌中成功高效表达。细胞实验证实rhFGF4蛋白通过阻止NF-κB、JNK以及p38的磷酸化来修复高糖诱导损伤的HUVEC并抑制其凋亡，降低其MDA、ROS含量。
结论：本研究成功得到高纯度并具有生物学活性的rhFGF4蛋白，并证实其对高糖损伤的HUVEC的保护作用与改善氧化应激水平相关。
[关键词]重组人成纤维细胞生长因子4；柱上复性；人脐静脉内皮细胞；氧化应激；细胞凋亡
本文引用：张煜,吴芬芳,张梦,等.rhFGF4在大肠杆菌中的表达、纯化及其对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用[J].温州医科大学学报,,51(7):-.
温州医科大学学报
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